بررسی روش بهینه انتقال ژن های باکتریایی بی فنیل کلرو بی فنیل دی اکسیژناز به گیاه آرابیدوپسیس (arabidopsis thaliana)

بی فنیل های پلی کلرینه شده (pcbs)، ترکیبات حلقوی کلرداری هستند که به دلیل خواصی چون مقاومت به حرارت و پایداری، در سطح گسترده در دهه های 1930 تا 1980 در صنایع گوناگون مورد استفاده قرار گرفتند. همین ویژگی پایداری و مقاوت به تجزیه شدن همراه با اثرات مضری که بر سلامت انسان می گذارند، سبب شد که تولید آن ها از دهه 1980 میلادی متوقف شود. در حال حاضر، آلودگی آب ها و خاک های سراسر جهان به pcbs، یکی از مشکلات مهم محیط زیست به شمار می آید. یکی از راه های کاهش آلودگی به pcbs انتقال و ببیان ژن های باکتریایی بی فنیل دی اکسیژناز (bpdo) که دارای توانایی تجزیه ی pcbs هستند به گیاهان می باشد. هدف پژوهش حاضر یافتن روشی برای انتقال همزمان ژن های bph a،bph e و bph g که اجزای رمز دهنده-ی آنزیم bpdo می باشند به گیاه آرابیدوپسیس بود. بر اساس نتایج بدست آمده، 3 ژن bph a ،bph e و bph g که در ناقل pgreen کلون شده بودند به باکتری های e. coli و اگروباکتریوم های lba4404 و c58c1و گیاه آرابیدوپسیس انتقال یافتند. در این آزمایش، انتقال دو پلاسمید pgreen و psoup به اگروباکتریوم به روش های انتقال پی در پی و انتقال همزمان صورت گرفت. روش انتقال پی در پی دو پلاسمید pgreen و psoupبه اگروباکتریوم موفقیت آمیز بود و نوترکیبی کلونی های انتخاب شده با روش کلونی pcr تایید شد. از طرف دیگر، در روش انتقال همزمان این دو پلاسمید به اگروباکتریوم هیچ کلونی بر روی محیط انتخابی مشاهده نشد. از لحاظ کارایی انتقال ژن به گیاه، بین دو سویه اگروباکتریوم lba4404 و c58c1بکار رفته در این پژوهش اختلاف وجود داشت. بیشترین تعداد گیاهان تراریخته (85/0%) با سویه lba4404 بدست آمد. تراریخت بودن گیاهچه-های آرابیدوپسیس با انتخاب گیاهان کاملا سبز در محیط دارای50 میلی گرم بر لیتر کانامایسین و هم چنین آزمونpcr تایید شد. گیاهان تراریخت با موفقیت به خاک انتقال یافته به رشد خود ادامه دادند.